胞质显微注射

服务介绍

胞质显微注射：利用TALEN或CRISPR Cas9技术设计打靶载体，体外转录为mRNA，并将其注射入受精卵的胞质中。注射完毕后，将受精卵移植入假孕母鼠输卵管内，待仔鼠出生后，用PCR及测序的方法筛选成功基因敲除/敲入的阳性仔鼠。

胚胎供体品系：小鼠【C57BL/6】大鼠【SD】

假孕受体品系：小鼠【ICR】 大鼠【SD】

内容包括：

l 显微注射前基因的准备。

l SPF级供体鼠与受体鼠的准备。

l 供体鼠超数排卵与正常雄鼠交配。

l 输精管结扎的雄鼠和雌鼠交配产生假孕母鼠。

l 受精卵的收集及体外培养。

l 将客户的基因稀释为注射浓度并注射入约300枚受精卵的胞质中。

l 把注射后所有成活的胚胎移植到假孕母鼠的输卵管中。

l 监测移植母鼠和出生的仔鼠。

l 仔鼠剪脚趾编号，性别鉴定及剪鼠尾巴进行样本的提取和DNA水平鉴定。

l 离乳及转基因鼠的移交。

服务周期：

胞质显微注射服务开始到生产出基因敲除/敲入鼠所需时间约10周。其中包括用于胞质显微注射的TALEN 或CRISPR Cas9打靶载体转录的mRNA的准备1周；供体鼠进行超数排卵和收集胚胎，将注射mRNA的成活胚胎移植到假孕母鼠输卵管内1周；妊娠3周；仔鼠出生后约6-8周内完成鼠尾DNA提取及基因组测序,筛选获得基因敲除/敲入仔鼠。

申请流程

l 客户咨询（咨询电话：18900910246)。

l 填写《胞质显微注射申请表》。

l 客签订《胞质显微注射协议书》。

l 客户将基因构建载体邮寄到实验室后，实验技术服务开始进行。